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Sigma-Aldrich 为德国达姆施塔特默克集团(Merck KGaA)或其子公司商标。默克 Sigma-Aldrich® 产品组合提供广泛而深入的实验室和生产材料组合,结合技术支持和科学合作伙伴关系,充分展现了我们共同的科学探索精神。
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默克密理博在 2015 年年底与 Sigma-Aldrich 合为一体,合并后的公司在美国和加拿大以 MilliporeSigma 名称运营,是默克集团的生命科学业务部 – 默克集团是 1250 亿美元生命科学行业的领头羊。我们的共同目标是通过与全球科学界合作,解决生命科学中最棘手的问题。如今,我们提供 300,000 多种产品,包括业内许多最受推崇的品牌。我们的产品和服务涵盖生物技术和生物制药生产链的每个环节,通过高水准的客户服务、简化的界面以及先进的电子商务和分销平台,创建完美的端对端工作流程。了解更多信息,请访问官网或拨打亚洲区技术服务热线:400-889-1988。  Merck、活力 M、Milli-Q、Millipore、SAFC、BioReliance、Supelco 和 Sigma-Aldrich 为德国达姆施塔特默克集团(Merck KGaA) 或其子公司商标 。默克生命科学业务在美国和加拿大地区以 MilliporeSigma 品牌运营。
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MP Biomedicals 是一家全球性的跨国公司,总部位于美国加利福尼亚州,并在欧洲、亚洲、澳洲、南美洲设有区域总部。公司生产和销售超过 55000 种产品,作为全球领先的生命科学类产品的供应商,至今已有 50 多年的历史。我们不断努力革新,以满足您对分子生物学、生物化学、细胞生物学等各个学科的研究和应用的需求。MP Biomedicals 拥有巨大的全球性分销网络,并在全球多处设有通过 ISO 认证和 FDA 批准的生产和销售机构。
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Millipore超滤管你真的用对了吗丨内含干货

人阅读 发布时间:2018-06-20 19:01








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事项NAmiconQ&A

  Q: Amicon® Ultra超滤管的膜材质是什么?

  A: Amicon® Ultra超滤管的膜材质为默克密理博特有的 Ultracel® 再生纤维素膜,生产工艺严格,截留分子量明确而精准,蛋白吸附损失最小。
 

  Q: 如果要用超滤的方法分离两种蛋白,那么这两个蛋白的大小需要相差多少?

  A: 按照经验,我们推荐两个蛋白的分子量要相差一个数量级(10倍)。
 

  Q: Amicon® Ultra超滤管可以用于病毒浓缩么?

  A: 可以。对于慢病毒,我们推荐Amincon®Ultra 100kDa; 对于腺病毒,推荐Amincon® Ultra 50kDa。具体的操作步骤,可以参考我们的病毒浓缩纯化试剂盒FTLV00003和FTAV00003的产品使用说明书。另提供AAV(腺相关病毒)的制备方法供参考。
 

  Q: Amicon® Ultrar超滤管可以用酒精消毒灭菌么?

  A: Amicon® Ultra与70%乙醇是兼容的,但是我们对灭菌处理的具体方法没有做相关的测试,所以无法提供更进一步的参考信息。
 

  Q: Amicon® Ultra超滤装置是否可以用于高压灭菌?

  A: Amicon® Ultra都是采用热封设计,不可以用高压高温灭菌。
 

  Q: Amicon® Ultra超滤管是否不含RNA酶?

  A: 我们不保证超滤管不包含RNA酶,建议您可以用0.1%DEPC在37度浸泡2小时,以完全灭活RNA酶C残留的DEPC可以用Milli-Q®超纯水洗涤除去。
 

  Q: 用Amicon® Ultra超滤管去除去污剂是有什么需要注意的吗?

  A: 去污剂因其独特的性质,当浓度大于临界微团浓度(Critical Micelle Concentration, CMC)时,去污剂分子会聚集形成微团分子而改变分子构象,这有可能会影响去污剂的去除效果,具体的操作步骤请垂询默克密理博技术支持专线400-889-1988-2分机。
 

  Q: 我的蛋白在浓缩时出现了沉淀为什么?

  A: 蛋白如果浓缩过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀。我们建议蛋白浓缩后的最终浓度不超过20mg/ml。对于对浓缩速度敏感而容易沉淀的蛋白,我们建议的改进方法是:

  1)离心力降为推荐离心力的30%-50%

  2)改选择截留分子量更大的过滤装置(如原本选用10k,此时可以选择30k)

  3)在浓缩过程中取出超滤管,用枪头反复吹吸几次
 

  Q: 浓缩后我发现浓缩液中没有目的蛋白,可能的原因是?

  A: 首先,Amicon® Ultra超滤管的最低起始蛋白浓度为25ug/ml.请确保您的样本的起始浓度大于这个浓度。

  其次,如果问题仍然出现,请不要丢弃您的样本滤过液用以分析可能的原因:

  1)如果您的样本在滤过液中,那么请排查:

  a) 您是否选择了合适截留分子量的超滤管(目的蛋白分子量的1/2或者1/3)?

  b) 使用的离心力是否是在最高范围内?如果您使用的是rpm,请换算成相应的g离心,具体换算方法请参考:

  https://www.msu.edu/~venkata1/gforce.htm

  c) 离心机最近是否有校准过?

  d) 您是否首次尝试这个蛋白?如果能确保你用同样的超滤管对其它蛋白成功操作的话,那么有可能是您的目的蛋白的原因。

  有时蛋白会因其本身的一些特性(构象差异)而影响浓缩效果,建议选用上一分子量级别的超滤管(如原本选用30k,此时可以选择10k)。

  2)如果您的样本也不在滤过液中:

  a) 您的样本起始蛋白浓度是否大于25ug/ml?

  b) 您用来确定样本浓度的方法是什么?是否可信?

  c) 您的目的蛋白是不是沉淀了?如果是,具体解决方法请参考上面的关于蛋白沉淀问题的解释。
 

  Q: 有时候我用超滤离心管连水都离不下来,可能是什么原因?

  A: Amicon® Ultra超滤膜中含有微量甘油。 如果出现这种情况,先用0.1N NaOH清洗再离心。最后用缓冲液或Milli-Q®水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用,如暂时不用,请保持润湿状态,避免重新干燥。

 

 

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